单细胞测序样本准备指南

一、新鲜组织样本 。 

1. 取样：

切取~200mg（黄豆粒大小）的新鲜组织后，尽可能快速去除周围的非目标部位（ 比如：脂肪、结缔组织、坏死组织等），获得的目标组织用预冷的1×PBS或生理盐水冲洗干净。

注意： 

1) 推荐取样量：肿瘤、器官类 0. 1~ 1g；软骨类≥1g；硬骨类≥10g；人血管类≥1g；鼠血管 ≥6cm；穿刺样本长度＞1.5cm 且2根以上，可以尝试，细胞量无法保证。 

2) 消化系统组织含有较多的分泌物，需要用预冷的 1×PBS 或生理盐水多次冲洗。

3) 若为手术电刀切割组织，将与电刀接触的焦黑坏死组织去除干净，保留新鲜组织。 

4) 取样时（尤其是病变组织）尽量避免取到坏死、硬化、钙化、纤维化的部位，减少杂质 引入。

2. 保存：无尘纸吸净组织样本表面的水分，立即放入加满组织保存液的保存管中（2~8℃预 冷；产品名称：MACS Tissue Storage Solution；货号：130-100-008；品牌：Miltenyi）。

注意： 

1）保存管中一定要加满组织保存液，避免管内产生气泡， 以防止组织长时间暴露于空 气 中。 

2）若组织样本过大，可切割成多个小块状进行保存。 

3）若是海洋生物样本，建议联系销售人员提供专属方案保存运输。

3. 运输：

拧紧管盖，将保存管用封口膜封好，再用纱布或泡沫纸包裹保存管；最后放入泡 沫箱中，并在泡沫箱中放入多个-20℃冷冻过的冰袋，将泡沫封好，推荐顺丰快递寄送 。武 汉同城可选择碎冰，装有保护液及样本的管子直接插入碎冰固定，同城寄送即可

注意： 

1) 保存管需要用泡沫纸包裹后再放入泡沫箱中，避免保存管直接接触冰袋，导致组织样本 结冰，从而严重影响制备的单细胞悬液质量。 

2) 一定要放入-20℃冷冻过的冰袋，不可使用-80℃冷冻过的冰袋，否则温度过低会导致组 织样本结冰，引发组织损伤细胞凋亡。 

3) 尽量快速送达，以保证组织从离体到解离时间不超过48 h，时间过长，会降低制备得到 的单细胞悬液质量，可能会对最终结果造成不可预估的影响。

二、 冰冻组织样本

冰冻组织样本只能用于组织提核（仅做单细胞核转录组测序实验） ，不能用于单细胞 转录组测序。 

1. 取样：

切取~200mg（黄豆粒大小）的新鲜组织后，尽可能快速去除周围的非目标部位（ 比如：脂肪、结缔组织、坏死组织等），获得的目标组织样本，用预冷的1×PBS或生理盐水 冲洗干净

 注意： 

1) 取样量：脑、肝脏组织 0. 1~ 1g；肿瘤、心脏、肌肉组织0.5-2g；其他组织准备前联系 技术同事，根据样本具体类型和病变情况采取针对性意见。

  2) 消化系统组织含有较多的分泌物，需要用预冷的1×PBS或生理盐水多次冲洗。 

3) 若为手术电刀切割组织，将与电刀接触的焦黑坏死组织去除干净，保留新鲜组织。 

4) 取样时（尤其是病变组织）尽量避免取到坏死、硬化、钙化、纤维化的部位，减少杂质 引入。 

2. 保存：

无尘纸吸净组织样本表面的水分，放入不含任何液体的冻存管中保存，拧紧管盖， 封口膜封好并立即放入液氮中速冻，-80℃冰箱中保存。

1)样本可长期稳定保存在液氮或-80℃冰箱中（液氮最佳），禁止反复冻融，避免温度变 化导致内部核酸降解。

2)建议使用冻存 3~6 个月内的冰冻组织织样本，样本保存质量较佳。针对长久保存的样 本，可先核酸质检合格后，进行后续实验。若样本有降解，建议客户重新提供样本。

3. 运输：干冰运输，顺丰寄送。干冰要足量，保证低温运输状态。 

4. 收样：收到样后，-80°C 冰箱冷冻存放，避免反复冻融 注意： 样本可长期稳定保存在液氮或-80℃冰箱中（液氮最佳），禁止反复冻融，避免温度变 化导致内部核酸降解。

三、新鲜细胞样本

1. 取样&保存：新鲜细胞制备完成后，使用 2~8℃预冷的 1×PBS +10% FBS 溶液重悬细胞， 若细胞易结团可使用 1×PBS+0.04% BSA 溶液（2~8℃预冷）重悬细胞，并在保存管中保存 

1) 新鲜细胞送样要求： 

细胞浓度 700~ 1200 cells/μl； 细胞悬液体积 >100μl 

细胞活性 >90%； 细胞结团率 <10% 

细胞直径 ＜40μm 细胞总数 一般不低于 1×10 5 个 

其他:细胞重悬液中无细胞碎片，且重悬使用的 1×PBS 或 1640 培养基中 ，不含有 Ca 2+ 、Mg 2+和非细胞的核酸分子。

2. 运输：拧紧管盖，将保存管用封口膜密封好，再用纱布或泡沫纸包裹保存管；放入存满 湿冰的泡沫箱中。最后顺丰快递寄送，尽量 2h 之内送达，不超过12h。若运输时间过长会 影响细胞质量，建议直接上门服务。

 四、 冻存细胞样本

1. 取样：将消化下来的细胞用 1×PBS 洗涤，然后 4℃ 、300～500g 离心 5min ，弃上清。 

2. 加细胞冻存液：向细胞沉淀物中加入适量体积的细胞冻存液（推荐 Thermo Fisher 品牌） ，并缓慢吹打混匀，使细胞密度达到 3×10 6～1×10 7个/ml。 

3. 细胞分装：按每管 1~ 1.5ml 的量分装于冻存管内，拧紧管盖，并做好标记。 

4. 保存：将冻存管放入梯度降温盒中-80°C 过夜后，液氮保存。 

5. 运输：干冰运输，顺丰寄送。干冰要足量，保证低温运输状态。 

6. 收样：收到样后，-80°C 冰箱避光冷藏，避免反复冻融 

注意 

1) 冻存前的细胞要求：

  细胞活性 >90% 细胞结团率 <10% 

细胞直径 ＜40μm 细胞总数 冻存前的细胞个数至少 为 1×10 5 个/管。 

其他 细胞重悬液中无细胞碎片，且重悬使用的 1×PBS 或 1640 培养基中 ，不含有 Ca 2+ 、Mg 2+和非细胞的核酸分子。 

2) 冻存细胞样本在液氮中可长期保存；若无液氮可保存在-80℃冰箱中 3~6 个月。 

3) 防止冻存的细胞样本反复冻融，避免温度变化使细胞质量变差。

 4) 建议使用冻存 3 个月内的细胞样本，活性较佳。若细胞活性太差，建议客户重新提供 样本。 

五、血液样本 

1. 取样：取适量新鲜血液（人：4~6ml；鼠：1ml 以上；其他：1~5ml ，建议越多越好）迅 速置于 EDTA 紫色抗凝管中保存。 

2. 运输：拧紧管盖，用封口膜密封好，再用纱布或泡沫纸包裹抗凝管，并放入存满湿冰的 泡沫箱中，8h 内送达实验室进行处理 

 注意 

1) 若只关注血液中的 PBMC（外周血单个核细胞），2~8℃保存/运输 8h 内送达即可。 

2) 若关注血液中的 PMN（中性粒细胞），建议常温保存/运输，6h 内送达。 

3) 若进行细胞核转录组测序实验，血液样本尽量在 8h 内进行有核细胞分离。 

4) 若运输时间过长，建议将血液样本密度梯度离心分选出 PBMC ，加入细胞冻存液并梯 度冻存，干冰运输。或者直接上门服务。 

六、 体液样本（脑脊液/淋巴液/关节液/腹水/灌洗液/组织积液/尿液等） 

1. 取样&保存：取适量体液（脑脊液/淋巴液/关节液：≥5ml ，腹水/灌洗液/组织积液：≥ 50ml，尿液：~50ml；建议体积越多越好）迅速置于合适的保存容器中保存。体液量充足的 情况下建议送 2~3 管以备用。 

2. 运输：拧紧管盖，用封口膜密封好，再用纱布或泡沫纸包裹抗凝管，并放入存满湿冰的 泡沫箱中，避免运输过程中剧烈震荡，寄送方式依具体样本类型决定 。

注意： 

1) 脑脊液内细胞对温度较为敏感，保存和运输过程中温度变化不宜过大，离体时间不宜过 长，建议离体2h内送至实验室进行处理； 

2) 淋巴液、关节液取样后加入5%-10%体积比的FBS进行保护，2-8℃运输，4h内送至实验 室进行处理； 

3) 灌洗液、积液和腹水等样本，取样后注意加入5%-10%体积比的FBS进行细胞保护， 2~8℃运输，48h内送至实验室处理。也可离心收集细胞后，加入适量的细胞培养基

如：DMEM ，RPMI 1640 等）重悬， 再向培养基中添加 5%-10% FBS 或含有 2% BSA 的血清进行细胞保护，2~8℃运输至实验室。 

4) 若运输时间过长/体液样本较脆弱，建议直接上门服务。 

七、植物样本 

1. 新鲜植物样本：活体整株植物样本可常温运输。例如愈伤组织，连带培养基常温运输； 水培植物样本，需要根部保持在培养液中并常温运输；土培样本连同营养土一块常温运输。 

2. 冻存植物样本：取新鲜植物组织至少 1~2g，剪切成小块，立即用锡箔纸包裹组织，并迅 速置于保存管中。拧紧管盖，用封口膜密封好，放入液氮中速冻 5min 以上。之后可转移 至-80℃冰箱冻存或长期放置于液氮中。最后干冰运输 

注意：

1) 植物取样选择幼嫩植株茎叶、茎尖、组培苗叶片等。 

2) 送样量保证每个样本单次实验至少 1~2g ，建议每个样本寄送 3 份，保证实验结果 

3) 运输整株植物保证根部有少量土壤或培养基。 

4) 建议用泡沫箱/玻璃罐运输，保护植物不被挤压。 

5) 一般新鲜植物样本常温运输，冰冻植物样本干冰运输。