代谢组学样品要求及准备

以下样品送样量是常规代谢组学项目要求及注意事项，其与蛋白质组学样品要求差别较大，需要注意： 

1. 代谢组学要求每组至少 6-10 个样品重复，整个项目样品数量较大，因此标识要清晰，防止样品错乱； 

2. 生物体内代谢处于动态过程中，取样时要进行液氮淬灭，以保持样品在实验结束时的代谢水平，样品 要提前进行分装，以保证后期解冻次数尽量少； 

3. 整个运输和保藏均需要严格低温，以尽可能降低样品在运输储藏过程中发生代谢变化，保证结果的真 实性； 

4. 需要特别指出的是，代谢组学要求原始样品尽可能精确称量，液体根据体积，固体根据重量，细胞根 据数量，尽量按照相同的量进行分装，或根据每管实际情况精确标注； 

5. 样品不得出现固液混合状态，例如液体浸泡的组织，含培养基的细胞或微生物，含水量过大的污泥。 液体样品需离心取上清，固体样品需完全去除液体； 

6. 代谢组样本低于极限送样量也可以进行检测，只是会影响鉴定量。

一、动物组织

动物组织@mg ×2 份

选取干净的目标部位组织，取材均一。用无尘吸水纸快速吸去残留 的体液，将组织剪切成边长 0.5cm 小块或 100mg 左右小块，精确称量后 将组织块在盛有液氮的锡纸槽中速冻，再装入液氮预冷的螺口冻存管中， 迅速进行液氮速冻 5min 以上，转移至-80℃冰箱冻存。

二、植物组织

1、植物组织如根茎叶等@mg ×2 份

选取干净的目标部位组织，取材均一且迅速。将样品剪切成 1-2mm2 小块，精确称量后装入预冷的离心管中，将盖子拧紧，在液氮速冻 5min 以上。或使用干净的锡箔纸包裹样品（精确称量后），再用液氮速冻 5min 以上，包装好的样品再放入自封袋，并清晰标示样品名称，-80℃冰箱保 存。

2、植物种子 2g ×2 份 

完整的植物种子，干冰运输；解剖后的种子组织，参见植物组织取 材方法。 

3、植物分泌 物 冻干粉 20mg 以上 ×2 份

常用的根系分泌物收集法有简单溶液收集、特定溶液收集、基质培 收集等，可根据自身实验要求选择。收集到的根系分泌物清洗溶液需进 行浓缩处理，推荐使用冻干技术。若使用特定溶液收集，请与实验室及 时沟通添加成份，以避免影响后续实验。 

三、微生物 

1、菌类 107个 （50mg） ×2 份

采用离心或其他方法分离微生物和培养基，收集微生物至 15mL 离 心管中，弃上清后，用预冷的 10mL PBS（或其他符合要求的缓冲液）溶 液洗三遍。用 1mL 1×PBS 重悬并精确计数，按照相同的细胞量（精确 计数）分装至新的 1.5mL 离心管中，8000×g 离心 5~10min，弃上清液氮 速冻后，-80℃冰箱保存。 

如不能精确计数，建议送样量不少于 50mg/份 

2、藻类 0.2g ×2 份 

根据不同藻类采取合适的离心力，分离的同时保证细胞完整，如 1000 ×g 离心 15min，去上清，PBS 洗涤三次，离心取沉淀，分装到多个 2mL 的离心管，不得固液混合，液氮速冻后保存至-80℃

四、细胞

1、悬浮细胞 107 ×2 份 

400~1000×g 离心 5-10min 收集细胞至 15mL 离心管中，弃上清后， 用预冷的 10mL PBS 溶液重悬并离心清洗细胞三遍。细胞沉淀用 1mL 1 ×PBS 重悬并精确计数，按照相同的细胞量（精确计数 107 个）分装至 新的 1.5mL 离心管中，400~1000×g 离心 5~10min，弃上清后完全吸弃 液体，液氮速冻后，-80℃冰箱保存。 

2、贴壁细胞 107 ×2 份 

采用胰酶消化或刮刀刮取后，PBS 重悬并精确计数，按照相同的细 胞量（精确计数 107个）分装至新的 1.5mL 离心管中，400~1000×g 离心 5~10min，弃上清后完全吸弃液体，液氮速冻后，-80℃冰箱保存。若已 知培养皿中细胞的精确数量，可直接倒掉培养基，用 PBS 快速清洗三遍， 用移液枪彻底吸尽清洗液后，将培养皿放在-20℃金属块上（或加少量液 氮猝灭细胞）。每皿（10~15cm）加入 1.2 mL 于-20℃预冷的甲醇：水（4:1） 溶液，用细胞刮刀刮下细胞，并完全转移至 1.5 mL 离心管中，于-80℃冰 箱保存。

五、血液和其他液体样本

1、血浆 0.1mL ×2 份

使用含抗凝剂的采血管（如 BD EDTA 血常规管），轻柔地上下颠 倒混匀，持续 8-10 次，以混匀血液和抗凝剂，然后 4℃，≤1300×g（根 据物种稍微进行调整）离心 10min。待血细胞完全沉降到管底后，用移 液器将上层血浆转移到 1.5mL 离心管内（防止溶血），每管不低于 100μL （精确量取），-80℃冷冻样品。 

2、血清 0.1mL ×2 份 

收集全血至真空采血管（如 BD 的红头真空采血管），动物血清可 用 10-15mL 离心管收集，静置 30- 45min， 4℃，≤1300×g（根据物种 稍微进行调整）离心 10min。待血细胞完全沉降到管底后，用移液器将上层血清转移到 1.5mL 离心管内（防止溶血），每管不低于 100μL（精 确量取），立即-80℃冷冻样品。 

3、尿液 1mL ×2 份 

晨起中段新鲜尿液（临床样本）或代谢笼 24h 新鲜尿液（动物样本） 直接分装到离心管中，收集后立即 4℃，400~1000×g 离心 10~15min， 去除细胞和杂质等，收集上清液。再 10000~15000×g，于 4℃下离心 10min 后，吸取中层澄清的尿液，用 1.5 mL 离心管分装，（精确量取）每管 1mL， -80℃冷冻样品。 

4、唾液 0.5-1mL ×2 份

禁食两小时以上，建议 9~12am 取样，4℃ 400~1000×g 离心 5min， 取上清，再 4℃，10000×g 离心 10min，取上清。或直接使用 0.22μm 滤 膜过滤后离心管分装，-80℃保存。 

5、泪液 0.5ml

用 capillary micropipette 或 Schirmer strip 收集样品于离心管，4℃， 10000×g 离心 10min，取上清到 0.5mL 离心管内，-80℃保存。 

6、细胞或者 微生物培 养上清液 溶液 1mL-10mL （冻干粉 20mg 以上） ×2 份 

收集培养上清于离心管中，400×~1000×g 离心 10min 去除细胞，取 上清 2000×g 高速离心去除细胞碎片和沉淀，再取上清分装，浓缩或冻干， -80℃冻存。培养基不得含有色素成分（细胞培养可使用无酚红培养基）。 

7、低浓度大 体积 冻干粉 20mg 以上 ×2 份 

对于低浓度大体积液体样品，如发酵培养上清、活性污泥上清和海 水等，代谢物浓度很低，为提取到足够的代谢物质，需要提前对大量液 体进行预处理。若单个样品需要处理体积超过 10mL，需对样品进行浓缩， 使体积小于 5mL 再进行送样，推荐采用冻干技术进行代谢物富集。 如大体积液体中含有人为添加成份，如氯化钠、硫酸镁等盐类，表 面活性剂、洗涤剂等发泡成份，苏丹红等染色成分需及时沟通，以免影 响后续实验。

六、动物粪便

动物粪便 或肠道内 容物 100mg ×2 份 

小/大鼠粪便：将待取样的鼠放进干净的铺有无菌滤纸的笼子里，鼠 排便后立即收集粪便样本，不同的鼠取样时要更换新的滤纸；单只鼠收 集 3-5 粒到灭菌离心管，液氮速冻，-80℃保存，干冰寄送；若单只鼠粪 便样本量不足，可根据实验需求，将组内多只数鼠粪便样本混合为一个 样品。 鼠肠道内容物：在实验对象死亡后，用无菌解剖刀，在无菌状态下 取出整个肠道，无菌水清洗肠道外表面，根据实验设计切取目的位置肠 段；用无菌手术刀挖取内容物置于无菌的离心管中，为保证实验顺利进 行，在采样允许的情况下，尽量多采集样品，液氮速冻，-80℃保存，干 冰寄送。 人体粪便：将双手洗干净，用采样的无菌勺挖取粪便内部没有接触空气 和地面的部分，挖取 2 满勺（2g 以上）。将挖取的粪便放入采样管中， 盖紧盖子，放入-80℃保存（如有条件，可进行液氮速冻）。

七、土壤和污泥样本

1、土壤 2g ×2 份

根据实验要求取地表下不同深度的土壤，一般表土样品需采集地表下 2-3cm 的样品，此层土壤有机物组成相对稳定，建议过 80-100 目筛（2mm） 精确称量后等量分装，根据实验目的，可采用常温、冰袋或干冰运输。 土壤样本原则上送样不要超过 10g，以防解冻时间过长造成代谢物损失。 

2、污泥 2g ×2 份 

污泥取样前需要匀质，活性污泥样本必须-80℃快速冷冻保存，不得 固液混合，并且干冰寄送